非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位

摘要：

旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系.作者使用Mega6.0软件绘制了 7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL软件预测了该基因所编码蛋白序列的二、三级结构;根据GenBank公布的ASFV序列(LR743116.1),合成D1133L基因并构建其重组真核表达质粒pCMV-D1133L,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,应用间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)研究了该蛋白的亚细胞定位.结果表明,通过ASFV解旋酶的基因系统进化树,发现5种解旋酶基因均相对保守.D1133L基因全长3 402 bp,表达的蛋白为124.63 ku,G+C含量为6.1％,A+T含量为10.6％;二级结构分析表明α螺旋占48.90％,扩展链占13.50％,无规卷曲为33.27％;三级结构分析表明六自由度结构(six degree of freedom,QMQE)为0.20,覆盖率84％,且预测以α螺旋为主的高级结构;通过LOCS-VMPSI分析预测,显示D1133L蛋白定位于细胞核内与细胞质内的概率是相同的.WB结果显示pCMV-D1133L质粒正常表达,IFA试验证明ASFV编码的解旋酶D1133L同时分布于细胞核和细胞质.本研究通过对D1133L基因序列、结构功能预测,并通过IFA验证了 D1133L亚细胞分布,为进一步揭示D1133L基因功能奠定了一定基础.

关键词：非洲猪瘟病毒;解旋酶;D1133L基因;序列分析;结构预测;亚细胞定位

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分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省科技重大专项-农业领域;国家自然科学基金联合项目;国家重点研发计划

在线出版日期：2021-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1953-1962