miR-186-5p调控猪原代前体脂肪细胞增殖和分化的研究

摘要：

旨在探究miR-186-5p对猪原代前体脂肪细胞增殖和成脂分化的调控作用及机制.本研究采集7日龄健康马身猪公猪的颈部皮下脂肪,分离培养马身猪原代前体脂肪细胞;猪原代前体脂肪细胞分为4组,分别转染miR-186-5p模拟物(mimics)及其对照组(mimics NC),miR-186-5p抑制剂(inhibitor)及其对照组(inhibitor NC),用CCK8和划痕试验分析猪原代前体脂肪细胞的增殖效果,油红O染色检测其成脂分化能力,qPCR检测其增殖和成脂分化相关基因的表达水平;预测miR-186-5p的靶基因,用双荧光素酶报告试验检测miR-186-5p与靶基因的相互作用.结果,当猪原代前体脂肪细胞中转染mimics时,miR-186-5p的表达量极显著升高(P<0.01),细胞增殖能力和增殖相关基因:增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinases 4,CDK4)的表达量以及预测靶基因去乙酰化酶2(sirtuins 2,SIRT2)的表达量都极显著降低(P<0.01),而细胞成脂分化能力和成脂分化相关基因:过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPA Rγ)、固醇调节元件结合转录因子1(sterol regulatory element binding transcription factor 1,SREBF1)、CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein 4,FABP4)、脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)的表达量都极显著升高(P<0.01);当猪原代前体脂肪细胞转染inhibitor时,miR-186-5p的表达量极显著降低(P<0.01),细胞增殖能力以及增殖相关基因PCNA和CDK4的表达量、预测靶基因SIRT2的表达量都显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01),而细胞成脂分化能力以及成脂分化相关基因PPARγ、SREBF1、C/EBPβ、FABP4、LPL的表达量都极显著降低(P<0.01).转染miR-186-5p mimics可以显著抑制SIRT23′UTR野生型双荧光素酶报告载体(SIRT2-Wt-psiCHECK-2)中荧光素酶的活性,但不影响SIRT23′UTR突变型双荧光素酶报告载体(SIRT2-Mut-psiCHECK-2)中荧光素酶的活性.miR-186-5p可以靶向结合SIRT2的3′UTR序列,降低SIRT2的表达,抑制马身猪原代前体脂肪细胞增殖,促进其成脂分化.

关键词：miR-186-5p、马身猪、原代前体脂肪细胞、增殖、成脂分化、靶基因

所属期刊栏目：52

分类号：S828.2(家畜)

资助基金：三晋学者支持计划;三晋学者支持计划;国家自然科学基金;山西省工程;山西省青年基金;山西省农业重点研发项目

在线出版日期：2021-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1247-1257