猪类无精症缺失基因DAZL的cDNA全长克隆、组织表达和亚细胞定位

摘要：

旨在获得猪类无精症缺失基因DAZL cDNA全长序列,阐明该基因的序列、mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征及亚细胞定位情况.本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)10月龄成年公猪为研究对象,屠宰收集组织样,利用RACE和RT-PCR技术获得DAZL基因cDNA全长序列;使用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测其mRNA多组织表达谱;在线分析蛋白质的结构特点和保守结构域;用体外细胞转染技术鉴定其在ST猪睾丸细胞中的定位.结果表明,BMI DAZL cDNA全长2 985 bp(KU705632),包含888 bp的CDS区,编码295个氨基酸(AOC89050);该基因位于猪13号染色体,含11个外显子.qPCR结果显示,DAZL mRNA在睾丸中特异高表达.生物信息学分析表明,猪DAZL蛋白含有哺乳动物RMP和DAZ同源区,无规则卷曲在二级结构中超过50％.进化分析表明,BMI DAZL氨基酸序列高度保守,与牛科的亲缘关系最为接近.pEGFP-C1-DAZL转染ST细胞后的荧光共定位结果显示,DAZL蛋白主要分布在细胞核中.本研究分别从DNA、mRNA和蛋白质层面阐明了 BMI DAZL基因的序列特征、表达、蛋白质结构和定位,为进一步研究DAZL在BMI精子发生方面的功能奠定基础.

关键词：版纳微型猪近交系、类无精症缺失基因(DAZL)、基因克隆、cDNA末端快速克隆(RACE)、组织表达、亚细胞定位

所属期刊栏目：52

分类号：S828.3(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;云南省应用基础研究计划面上项目

在线出版日期：2021-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：683-692