鸡骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定

摘要：

旨在建立鸡骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cell,MSC)体外分离、培养、纯化、诱导分化及鉴定的方法.选取12胚龄SPF鸡胚,综合松散肌肉纤维和游离纤维基质层细胞等原理,对分离细胞使用的酶以及后续的细胞纯化、诱导分化方法进行优化;并从形态学、细胞分化能力、生长曲线、免疫荧光、RT-PCR等方面对MSC进行鉴定,从而提出一种鸡骨骼肌卫星细胞的混合酶消化分离培养方法.结果表明,刚分离纯化后的细胞折光性强,24 h贴壁展开后呈纺锤状;待诱导分化后能形成排列整齐的多核肌管;CCK-8测定细胞生长曲线呈典型的"S"型;优化后,细胞存活率为(90.82±1.294)％,细胞纯度为(90.44±1.264)％;免疫荧光检测标志性基因Pax7、Desmin表达阳性;RT-PCR检测标志性基因Pax7、MyHC、MyoD1呈阳性;并且分化前标志性基因Pax7表达量是分化后的1.705倍,分化后期标志性基因MyHC表达量是分化前的13.073倍.该试验建立了一种快速简便的鸡骨骼肌卫星细胞的体外培养方法,为研究鸡骨骼肌细胞生物学机制、肉鸡品种优化、细胞移植修复提供良好的细胞模型.

关键词：骨骼肌卫星细胞、分离、培养、诱导分化、鉴定

所属期刊栏目：52

分类号：S831.1(家禽)

资助基金：江苏省农业科技自主创新资金项目;江苏省高校优势学科建设工程资助项目PAPD

在线出版日期：2021-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：676-682