牦牛IGF-Ⅱ干扰载体的构建及其转染对睾丸支持细胞的影响

摘要：

旨在构建干扰胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)的重组质粒载体,研究IGF-Ⅱ对牦牛睾丸支持细胞的影响.本研究设计并合成针对牦牛IGF-Ⅱ的shRNA寡核苷酸,并将其克隆至pLKO.1质粒载体上,转染牦牛睾丸支持细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定的细胞株,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测IGF-Ⅱ基因和蛋白的表达,采用细胞生长分析仪分析支持细胞的增殖凋亡情况.结果 显示,干扰牦牛IGF-Ⅱ表达的pLKO.1质粒载体构建成功,其可在睾丸支持细胞中稳定表达,且能有效抑制IGF-Ⅱ基因的表达.与对照组相比,pLKO.1-shRNA2的干扰效率最显著,IGF-Ⅱ的表达量下调至19.1％ (P＜0.05),且pLKO.1-shRNA2可使内源性IGF-Ⅱ蛋白的表达量减少76.3％(P＜0.05).pLKO.1-shRNA2质粒转染及筛选得到的稳定细胞株培养48 h后的细胞分裂增殖活性显著低于对照组(P＜0.05).qRT-PCR结果显示,干扰内源性IGF-Ⅱ后,睾丸支持细胞中的IGF-Ⅰ和IGF-ⅡR基因表达出现了显著的上调(P＜0.05),IGF-ⅠR与Bcl-2的表达出现了显著的下调(P＜0.05).综上表明,牦牛IGF-Ⅱ干扰质粒构建成功,其转染至牦牛睾丸支持细胞有效抑制了IGF-Ⅱ的表达,改变了IGF-ⅠR与Bcl-2的表达模式,潜在影响了牦牛支持细胞的分裂增殖,具体作用机制有待进一步研究.

关键词：牦牛、支持细胞、IGF-Ⅱ、干扰、细胞增殖

所属期刊栏目：51

分类号：S823.85(家畜)

资助基金：国家“十三五”重点研发专项;西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目

在线出版日期：2020-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2138-2146