鸡HMIT基因的克隆与表达分析

摘要：

旨在克隆鸡H+/肌醇转运蛋白(H+/myoinositol transporter,HMIT)基因的转录序列,并检测HMIT基因在鸡不同组织中的表达情况,以及外源胰岛素处理对HMIT基因相对表达量的影响.本研究以AA肉鸡为试验动物,采用RT-PCR技术克隆鸡H M I T基因全编码区序列,采用生物信息学技术分析其编码蛋白的生物学特性,利用荧光定量PCR检测H M I T基因在大脑、肝、腹脂、腿肌、心、肾、空肠和回肠等组织中的表达情况,并检测其在肾和大脑中进行胰岛素处理120和240 min后的表达情况.结果表明,以NCBI预测的鸡H M I T(XM_001232939.5)序列为模板设计引物,成功克隆出鸡HMIT基因(1694 bp,GenBank登录号:MN708211).克隆的鸡H M I T编码区全长1380 bp,相比XM_001232939.5预测的编码序列少561 bp,预测编码含有459个氨基酸组成的蛋白.核苷酸和氨基酸序列比对发现,鸡HMIT在物种间高度同源,共线性分析显示,HMIT所在的1号染色体区域在物种间也是高度保守的.HMIT编码的蛋白质是一种不稳定的亲水性蛋白质,其二级结构和三级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主.跨膜结构分析显示,鸡HMIT存在8个明显的跨膜结构域.亚细胞定位结果表明,鸡HMIT蛋白分布于质膜(52.3％)、内质网(21.7％)、液泡(17.4％)、线粒体(4.3％)和高尔基体(4.3％).实时荧光定量PCR检测结果显示,HMIT基因在鸡大脑和肾表达量最高,且显著高于其他组织(P<0.05).胰岛素处理240 min后,HMIT在肾和大脑中的表达量都显著低于PBS对照组(P<0.05).本研究克隆获得了鸡HMIT的全编码区,生物信息学分析及组织表达特性研究为深入探索鸡HMIT基因的生理功能和调控机制奠定基础.

关键词：HMIT、基因克隆、生物信息学分析、组织表达、胰岛素

所属期刊栏目：51

分类号：S831.2(家禽)

资助基金：智汇郑州 .1125聚才计划-创新领军人才项目

在线出版日期：2020-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1811-1822