猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用

摘要：

旨在采用环介导等温扩增(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)相结合的方法,建立一种快速、特异,过程可视化的猪肺炎支原体(M yco plasmah yo pneumoniae,Mhp)检测方法.针对猪肺炎支原体(Mhp) P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,进行LAMP扩增反应.将生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条完成扩增产物的检测.经优化,LAMP最佳反应条件为65℃,反应15 min,从基因组DNA提取到LFD结果判断只需40 min左右,比常规PCR技术缩短近2h.LAMP-LFD可特异性地检出猪肺炎支原体(Mhp),对猪鼻支原体(Mhr)及猪圆环病毒(PCV)等常见猪病病原的检测结果为阴性.灵敏性试验表明,LAMP-LFD对Mhp的检测灵敏度为1×100个拷贝DNA,是普通PCR的1 000倍.利用本方法可从采集的88份临床疑似病料样品中检测到64份阳性,国标PCR方法可检测到56份阳性,符合率可达90.90％.综上,本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、准确地应用于Mhp的检测,而且灵敏度高、操作简单、仪器设备依赖性低、检测成本低、耗时短,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值,有望发展成为Mhp快速检测的有效手段.

关键词：猪肺炎支原体、环介导等温扩增技术、横向流动试纸条、诊断

所属期刊栏目：51

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省生猪产业技术体系疫病控制岗位;山东省重大科技创新工程项目;“十三五”重点研发计划;山东省农业重大应用技术创新项目

在线出版日期：2020-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1419-1428