绵羊c-Myc与EGFP融合蛋白的真核表达及其对细胞增殖的调控作用

摘要：

为了探讨c-Myc基因对细胞增殖及相关基因表达的调控作用,本试验构建了c-Myc-(G4S)3-EGFP融合基因的真核表达载体pc-Myc-EGFP,并利用生物信息学分析了其结构和理化特征.转染后分别通过细胞计数和qRT-PCR检测了其对绵羊胚胎成纤维细胞(sheep embryonic fibroblasts,SEF)增殖及相关基因表达的影响,并利用启动子分析软件解析了相应的表达调控机制.酶切鉴定和测序结果表明,载体构建成功.生物信息学分析表明,绵羊c-Myc蛋白主要定位于细胞核,含有螺旋环螺旋(helix-loop-helix,HLH)结构域,其分子量为48 474.78 u.融合蛋白c-Myc-(G4S)3-EGFP有较强的亲水性,且含有31个磷酸化位点.因(G4S)3有较高的灵活度(9.848 5),两侧的c-Myc和EGFP都保持各自的空间构象且互不干扰.进一步的细胞试验结果表明,重组质粒pc-Myc-EGFP在SEF中能够表达.过表达c-Myc促进了SEF的增殖,使cyclin D2、Cdk4、Cdk6、cyclin E1、cyclin A2、cdc25A mRNA的表达水平分别升高至5.20、3.10、6.54、6.52、23.37和8.22倍(P＜0.01),E2F1 mRNA的表达升高至1.83倍(P＜0.05).启动子分析结果表明,各基因的5'调控区存在c-Myc和E2F1的结合元件.综上所述,绵羊c-Myc通过上调细胞周期相关基因的表达促进SEF细胞增殖,c-Myc的作用机制可能是通过直接作用于靶基因5'调控区的E-box元件,也可能是通过其他转录因子(如E2F1)的间接调控作用而实现.

关键词：绵羊、c-Myc基因、EGFP、真核表达、生物信息学、细胞周期相关基因、调控元件

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分类号：S826.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;国家留学基金;山西省回国留学人员科研资助项目;山西省留学回国人员科技活动择优资助项目;山西省平台基地和人才专项优秀人才科技创新项目;山西省重点研发计划项目;山西农业大学中青年拔尖创新人才支持计划;山西农业大学横向科技项目

在线出版日期：2020-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：965-975