荣昌猪BMP15基因通过TGF-β R Ⅱ激活SMAD4信号分子机制研究

摘要：

本研究旨在阐明荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前不同发育期的表达特性及其与SMADs信号相关基因的表达关系.采集1月龄、3月龄及5月龄荣昌猪卵巢组织,利用qRT-PCR及石蜡切片免疫荧光染色法分析荣昌猪不同月龄卵巢组织内B MP 15基因表达及细胞定位特征;利用5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白及TGF-β受体抑制剂(LY215799和LY2109761),应用qRT-PCR及Western blot方法分析BMP 15及SMADs信号通路相关基因SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD7、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGFβ R Ⅰ和TGF-β R Ⅱ表达特征及BMP15/SMADs信号通路.结果 表明:从1月龄至5月龄,随着荣昌猪生长发育,卵巢组织内BMP15基因mRNA表达量呈上调表达(P＜0.05);石蜡切片免疫荧光试验表明,5月龄卵巢组织卵母细胞周围颗粒细胞内存在BMP15蛋白荧光信号;从3月龄至5月龄的卵巢组织内BMP15、SMAD4、TGF β1及TGFβRⅡ基因在mRNA水平呈上调表达(P＜0.05),而SMAD2、TGF-β2及TGF-βR Ⅰ呈下调表达(P＜0.05);通过5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白、TGF-βR Ⅰ/Ⅱ及TGF-βRⅠ受体抑制剂培养,发现TGF-β R Ⅰ/Ⅱ抑制剂(LY2109761)明显抑制TGF-β R Ⅱ受体蛋白的表达,TGF-β R Ⅰ抑制剂(LY2157299)不能抑制TGF-β R Ⅱ受体蛋白的表达.上述结果表明,荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前的卵巢组织内呈上调表达,SMAD4、TGF-β1及TGF-βRⅡ也呈上调表达.本试验研究表明BMP15基因通过TGF-β R Ⅱ介导SMAD4信号分子调控下游基因的表达,为进一步研究荣昌猪BMP15基因在卵泡发育中发挥的作用提供理论依据.

关键词：荣昌猪、BMP15、SMAD、卵母细胞、TGF-β

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分类号：S828.8(家畜)

资助基金：中央高校基本科研业务专项基金;西南大学荣昌校区青年科学基金;重庆市基础研究;前沿探索专项项目基金

在线出版日期：2020-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：754-762