干扰Smad3促进山羊脂肪细胞分化

摘要：

旨在克隆山羊Smad3的基础上,明确其组织和细胞表达谱,最终阐明干扰Smad3基因对山羊肌内和皮下脂肪细胞分化的影响.本研究选用5只体况良好的1周龄简州大耳羊,空腹24 h后屠宰并采集相应组织和细胞进行试验.利用RT-PCR技术克隆山羊Smad3基因cDNA区序列并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术检测Smad3基因的组织和细胞时序表达水平;并且合成靶向Smad3的siRNA,采用油红O染色从形态学上明确干扰Smad3对山羊前体脂肪细胞成脂分化的影响,利用qPCR检测干扰Smad3对脂肪细胞分化标志基因C/EB Pα、C/EB Pβ、LPL、SREBP1、AP2、PPARγ、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF6、KLF7、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15以及Smads相关基因Smad2、Smad4、smad7和TGF-β1基因mRNA表达水平的影响,探讨可能的作用机制.结果,获得山羊Smad3基因1 449 bp,其中CDS区序列为1 278 bp,编码425个氨基酸;Smad3在山羊各组织中具有广泛表达特性,且在肾脏中的表达水平最高(P＜0.01);Smacl3均在山羊肌内和皮下两种脂肪细胞诱导分化的36 h表达量最低,极显著低于在未分化前体脂肪细胞中的表达丰度(P＜0.01);干扰Smad3后发现显著促进了山羊肌内和皮下脂肪细胞中脂滴的聚集,且脂肪细胞分化标志基因、KL F3、KLF4、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15的表达水平显著上升(P＜0.05),Pref-1的相对表达水平极显著下降(P＜0.01),同时干扰Smad3基因下调了Smad2、Smad4和Smad7基因的相对表达水平(P＜0.05).研究结果指出,干扰Smad3促进山羊脂肪细胞分化,且可能通过调控脂肪细胞分化标志基因C/EBPa、C/EBPβ、LPL、SREBP1、AP2、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15等及协同Smad2、smad4和Smad7的表达来实现的.

关键词：山羊、Smad3、基因克隆、RNA干扰、肌内脂肪细胞、皮下脂肪细胞

所属期刊栏目：51

分类号：S827.2;S813.3(家畜)

资助基金：国家重点研究计划“畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发”专项;国家自然科学基金;肉用山羊舍饲养殖综合技术推广应用;四川省应用基础研究计划重点项目;西南民族大学研究生创新型科研项目

在线出版日期：2020-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共15页

页码：475-489