猪星状病毒4型SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：

为建立一种快速检测猪星状病毒4型(PAstV4)的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物,并将扩增片段克隆到pMD19-T载体上;将构建的重组质粒作为标准品建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,并对建立方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证.结果 显示,建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法最低检测量为50.3拷贝·μL-1,其灵敏度是普通PCR的100倍;与CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、PDCoV无交叉反应,特异性较好;建立的标准曲线呈良好的线性关系,相关系数R2 =1.00.应用该方法检测了2018-2019年收集的43份临床样品,阳性率为18.6％.本研究为猪星状病毒4型的临床检测建立了一种快速、灵敏、特异性强的方法.

关键词：猪星状病毒、荧光定量、SYBR Green Ⅰ

所属期刊栏目：51

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：河北省重点研发计划项目;河北省农业产业技术体系生猪创新团队

在线出版日期：2020-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：404-408