一种自发胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞模型构建

摘要：

本研究旨在突变3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4(GluT4)的基因序列,造成GluT4功能障碍,从而获得一种稳定、自发胰岛素抵抗的脂肪细胞模型.利用CRISPR/Cas9技术对3T3-L1细胞的GluT4编码区进行定向切割,通过流式细胞术和基因测序筛选稳定突变的细胞株;使用CCK-8法检测所筛选细胞株的增殖活力;对细胞进行成脂诱导分化,油红O染色以判断细胞成脂分化能力;以胰岛素刺激下葡萄糖摄入量确定细胞对胰岛素的抵抗程度;qPCR和Western blot检测胰岛素抵抗细胞成脂分化过程中关键基因的表达.结果 表明:第九外显子处13 bp的缺失导致3T3-L1细胞GluT4蛋白功能障碍,这一突变不影响细胞的增殖活力;成脂诱导分化过程中,该细胞株表现出严重且稳定的自发胰岛素抵抗,葡萄糖摄取受阻,与成脂分化和脂质合成相关的基因表达显著或极显著下调(P＜0.05或P＜0.01).综上所述,GluT4功能障碍阻碍了脂肪细胞响应胰岛素的葡萄糖摄取,从而造成脂肪细胞产生自发的胰岛素抵抗;本研究从多个角度对该胰岛素抵抗脂肪细胞模型进行检测分析,验证了其稳定性和有效性,为脂肪营养代谢和胰岛素抵抗相关研究提供了新材料.

关键词：葡萄糖转运蛋白4、胰岛素抵抗、3T3-L1细胞、成脂分化

所属期刊栏目：50

分类号：R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金81770832;转基因生物新品种培育重大专项2016ZX08010-003;中国农业科学院科技创新工程ASTIP-IAS05

在线出版日期：2019-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1475-1485