应用CRISPR/Cas9敲除HeLa细胞DDX21基因对新城疫病毒复制的影响

摘要：

解旋酶家族是一类对所有生物都至关重要的酶,主要功能是基因解旋,DEAD/H-box家族RNA解旋酶是一类重要的解旋酶.DEAD-box RNA解旋酶DDX21被证实可能调控宿主细胞先天性免疫.新城疫病毒(NDV)是一种对养禽业危害严重的病原,NDV能够通过多种手段调控宿主先天性免疫,为了探讨DDX21如何调控NDV复制,本研究应用CRISPR/Cas9系统建立DDX21基因敲除的HeLa细胞系,并验证其对NDV复制的影响.针对DDX21基因共设计6条sgRNA,构建敲除载体并电转染细胞,通过药物筛选、亚克隆筛选后,以PCR和Westernblot进行敲除效率的双重鉴定,并比较野生型和DDX21敲除细胞中NDV的复制效率.结果 显示,由于DDX21对细胞生长至关重要,因此仅获得一株DDX21杂合子敲除细胞,Western blot结果显示DDX21表达量被显著抑制,NDV对在敲除细胞上的复制滴度明显低于野生型细胞,说明DDX21发挥正调控NDV复制的作用,本试验为DDX21调控抗病毒先天性免疫研究奠定了基础.

关键词：CRISPR/Cas9、DDX21、新城疫病毒、复制

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分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31872453;国家自然科学基金重点项目31530074;国家重点研究开发计划2018YFD0500100

在线出版日期：2019-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1433-1440