绵羊miR-150启动子的鉴定及生殖激素对其转录调控研究

摘要：

旨在对绵羊miR-150基因的启动子进行鉴定以及探索生殖激素对miR-150启动子转录调控的影响.本研究利用生物学软件预测雌性绵羊(小尾寒羊)卵巢miR-150启动子区域及繁殖相关转录因子结合位点,构建重组质粒,并利用双荧光素酶报告基因检测miR-150的启动子活性.通过在无血清培养基内添加FSH、LH和E2,进行miR-150启动子重组质粒转染并检测miR-150启动子活性.结果,分别利用Promoter 2.0和PROMO软件预测出miR-150启动子区域和转录起始位点,并获得了与繁殖相关转录因子结合位点.所预测的绵羊miR-150启动子片段序列长度为582 bp,且成功构建miR-150启动子质粒,并确定绵羊颗粒细胞的最佳转染效率(脂质体∶质粒DNA=1∶1)和质粒最佳转染比例(50∶1),从而验证了所预测的区域具有启动子活性.此外,FSH、LH和E2处理组与对照组(无激素组)相比,miR-150启动子的活性均显著下调(P＜0.05).结果 表明,生殖激素可以通过影响绵羊miR-150启动子活性来调控miR-150基因的表达,为miR-150调控卵泡发育的机制研究提供了新思路.

关键词：miR-150启动子、生殖激素、绵羊、转录调控、颗粒细胞

所属期刊栏目：50

分类号：S826.2(家畜)

资助基金：河北省高等学校科学技术研究青年基金项目QN2015162;河北省首批青年拔尖人才支持计划2016-2018;河北农业大学青年学术带头人支持项目2015-2017;河北省自然科学基金项目C2019204039

在线出版日期：2019-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1358-1366