CRISPR/Cas9介导的猪IPEC-J2细胞CD13基因敲除细胞系的建立

摘要：

旨在利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术制备CD13基因敲除的IPEC-J2(猪空肠上皮细胞系)细胞,揭示细胞表面分化抗原13 (cluster of differentiation 13,CD13)在肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用.本研究在猪CD13基因第2外显子区域设计2个向导RNA(guide RNA,gRNA),命名为g3、g5,然后分别将g3和g5克隆到pX330-GFP和pX330-RFP载体骨架上,电转染IPEC-J2细胞,48 h后通过流式细胞术分选具有双荧光标记的细胞,培养并获得单克隆细胞,PCR扩增、测序,从而获得CD13基因纯合敲除的阳性细胞系.对获得的20个细胞单克隆进行PCR,并挑取部分克隆PCR产物测序,发现共有7个克隆发生了基因片段缺失,其中1个克隆为单等位基因片段缺失,3个克隆为双等位基因杂合片段缺失,3个克隆为双等位基因纯合片段敲除.本研究检测双等位基因纯合片段敲除细胞的蛋白表达水平,其结果显示,在该纯合敲除细胞中CD13蛋白几乎不表达,表明成功构建了CD13敲除的IPEC-J2细胞系.本研究获得的CD 13基因敲除细胞系为探究CD13在猪肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用奠定了基础.

关键词：CRISPR/Cas9、细胞表面分化抗原13、IPEC-J2

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分类号：S828.2(家畜)

资助基金：国家转基因生物新品种培育重大专项2018ZX08010-08B;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目2017ywf-zd-9;广东省动物分子设计与精准育种重点实验室[2019]75号;中国农业科学院科技创新工程ASTIP-IAS05

在线出版日期：2019-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1319-1327