牛卵泡TEDDM1表达特点及其功能分析

摘要：

旨在研究牛卵泡跨膜附睾蛋白1 (transmembrane epididymal protein 1,TEDDM1)的分子特征和立体结构,并结合TEDDM1在不同生理状态牛卵泡的表达特性分析其功能.本研究采集牛发情期第一卵泡波优势卵泡(dominant follicle,DF)和从属卵泡(subordinate follicle,SF),分别分离颗粒细胞(granulosa cells,GCs),提取总RNA后反转录,设计牛TEDDM1特异性引物进行PCR扩增、克隆、测序,获得全CDS区后运用生物信息学方法对序列结构进行分析;以牛RPLP0作为内参基因,在DF和SF中使用qRT-PCR对TEDDM1的表达量进行检测;兔抗TEDDM1一抗检测TEDDM1在牛卵泡中的表达和定位.结果 表明,TEDDM1基因CDS区全长903 bp,编码300个氨基酸,有7次跨膜的α螺旋结构,属于典型的G蛋白偶联受体,该基因氨基酸序列与非洲野牛(Bison bison bison)序列相似性最高,为99.4％;功能域分析表明,TEDDM1分子中存在未知功能结构域,蛋白家族716(domains of unknown function protein families 716,DUF716)结构域.qRT-PCR分析表明,TEDDM1 mRNA在SF的表达量显著高于DF(P＜0.05);免疫组化分析表明,TEDDM1在DF和SF的颗粒层和膜层细胞均有表达,特异性显色强度表明TEDDM1在SF颗粒层和膜层细胞表达量均高于DF.本研究为进一步探讨TEDDM1在牛卵泡发育过程中的调控作用及其在信号转导和激素调节中的功能提供了依据,为后期深入研究牛卵泡发育机理奠定基础.

关键词：牛、卵泡、TEDDM1、G蛋白偶联受体、结构

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分类号：S823.3(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31873002;山西省国际科技合作项目201603D421006;山西省三晋学者和人才引进项目;山西省重点研发计划项目201703D221020-1,201803D31062;山西农业大学创新基金项目zdpy201403/201503;山西农业大学青年拔尖创新人才支持计划TYIT201403

在线出版日期：2019-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1189-1197