检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用

摘要：

纽布病毒(nebovirus,NeV)是国内新发的犊牛腹泻病原,本试验目的是建立检测NeV的real-time RT-PCR方法.根据国内NeV流行株的聚合酶基因(RdRp)序列设计引物,通过反应条件和体系优化,成功建立基于TB Green检测NeV的real-time RT-PCR方法.结果 显示:该方法在2.9×101～2.9×109 copies·μL-1之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2 =0.999 4,扩增效率为98％;该方法只特异性检出NeV,不检出常见无关病原;最低检测下限为29 copies·μL-1;批内和批间的变异系数分别为0.89％～1.89％和0.83％～1.15％;该方法对临床样本的检出率高于文献报道的三种检测方法(P＜0.05).对2018年8-11月采自新疆和辽宁的135份奶犊牛腹泻样本中NeV的检出率为67.41％,场阳性率为100％ (15/15).所建方法的特异性和稳定性好、灵敏度高,为NeV的检测和流行病学调查提供了有力的手段.

关键词：nebovirus、实时荧光定量RT-PCR、犊牛腹泻、检测

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十三五”国家重点研发计划课题2016YFD0500907;国家民委“青藏高原动物疫病防控创新团队”13TD0057

在线出版日期：2019-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：893-900