基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用

摘要：

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列.以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物.以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物.以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA(indirect ELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测.结果:从阳性病料中扩增出大小为285 bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功.采用1 mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达.Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性.ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1 μg· mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000.阳性判定值为S/P≥0.273.批内和批间系数均小于10％,表明该方法具有较好的重复性.PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性.检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59％(266/439).结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法.

关键词：猪圆环病毒3型、ORF2基因、Cap蛋白、原核表达、ELISA检测

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分类号：S854.43;S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家生猪产业技术体系CARS-35

在线出版日期：2019-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：454-460