小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选

摘要：

旨在选择小鼠卵巢组织中合适的内参基因,为研究卵巢发育过程中基因表达提供可靠数据.以不同年龄(0日龄、3周龄、5周龄、8周龄)小鼠卵巢组织为试验材料,Trizol法提取样本总RNA,并合成cDNA,根据已报道的小鼠(Mus musculus)各组织中相对稳定表达的8个常见内参基因(Gapdh、β-actin、β-tubulin、18S rRNA、16S rRNA、H2afz、Ubc、Rpl13a)的GenBank登录序列设计引物,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)方法构建卵巢cDNA等梯度(1∶10)稀释后的标准曲线;利用geNorm分析候选内参基因的表达稳定性(M);NormFinder筛选表达最稳定的内参基因;BestKeeper计算qRT-PCR结果的标准差(SD)和变异系数(CV),从而预测候选内参基因的稳定性.结果表明,8个内参基因的引物特异性较强,具有良好的线性关系;候选内参基因的表达稳定度排序:Gapdh=β-actin＞18S rRNA＞Ubc＞16S rRNA＞H2a fz＞Rpl13a＞β-tubulin;其中Gapdh表达稳定性最好,且标准差及方差系数最小(SD:0.32,CV:1.95),H2afz标准差及方差系数最大(SD＞1.0,CV:5.76).综上表明,本研究成功获得出生后小鼠卵巢发育过程中稳定表达的内参基因(Gapdh和β-actin),可作为其基因表达研究中的最佳候选内参.

关键词：小鼠、卵巢、qRT-PCR、内参基因、表达稳定性

所属期刊栏目：50

分类号：S814(普通畜牧学)

资助基金：四川省科技支撑计划2017NZ0076;牦牛遗传资源与保护创新团队13CXTD01

在线出版日期：2019-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：446-453