猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白的ITIM基序对IFN-β产生的正调节作用

摘要：

为了研究PRRSV M蛋白的ITIM基序对IFN-β产生的激活机制,以PRRSV Hn-1/06毒株cDNA为模板扩增ORF6基因片段,分别构建了重组质粒pcDNA3.0-GP6、pcDNA3.0-GP6△ITIM(缺失ITIM基序).将重组质粒分别转染Marc-145细胞,用荧光定量PCR方法检测TRIF、MyD88、TRAF6、IRF3、IRF7、NF-κB和IFN-β的mRNA转录水平;结果表明,pcDNA3.0-GP6组与pcDNA3.0-GP6△ITIM组相比:TRIF、IRF3、IRF7 mRNA转录水平上调(此处为总体趋势,个别时间点可能不完全相符,下同),MyD88、TRAF6 mRNA转录水平下调.分别将重组质粒和Poly(I:C)共转染Marc-145细胞,检测TRIF、IRF3、IRF7、NF-κB和IFN-β mRNA转录水平;结果表明,pcDNA3.0-GP6组与pcDNA3.0-GP6△ITIM组相比,TRIF、IRF3、IRF7 mRNA转录水平上调,NF-κB、IFN-β mRNA转录水平在36 h上调.将SHP-1-siRNA-781、SHP-2-siRNA-1335分别与pcDNA3.0-GP6、pcDNA3.0-GP6△ITIM重组质粒共转染Marc-145细胞,通过荧光定量PCR方法检测TRIF、IRF3、IRF7、NF-κB和IFN-βmRNA转录水平;结果表明,沉默SHP-1后,pcDNA3.0-GP6组与pcDNA3.0-GP6△ITIM组相比,TRIF、IRF3、IRF7和IFN-βmRNA转录水平12h后显著下调;而沉默SHP-2后,TRIF、IRF3、NF-κB、IFN-βmRNA转录水平均为先升高再降低,后趋于稳定,而IRF7mRNA转录水平被持续上调到48 h.M蛋白的ITIM基序可能通过调节TLR3-TRIF依赖型信号通路激活IFN-β的产生;SHP-1在M蛋白的ITIM基序激活Ⅰ型干扰素的信号传导途径中可能起关键调节作用,而ITIM基序与SHP-2的关系还需要进一步探索.本试验结果为进一步明确ITIM基序的作用机制提供参考.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、M蛋白、ITIM基序、荧光定量PCR、IFN-β

所属期刊栏目：49

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金重大项目31490600;国家自然科学基金面上项目31572520

在线出版日期：2019-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：2680-2689