基于液质联用技术定量分析牛体外受精胚胎中谷胱甘肽含量

摘要：

旨在为探索外源谷胱甘肽(glutathione,GSH)影响胚胎发育的机制提供研究方法.将牛体外受精胚胎分别置于含GSH(3 mmol·L-1,处理组)和不含GSH(对照组)的培养液中培养7d,统计两组胚胎的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率和囊胚总细胞数;并分别采用荧光染色法和液质联用技术(liquid chromatography mass spectrometry,LC/MS)对不同发育阶段的牛受精卵(受精后8、18、24、32 h)中GSH进行定量和跟踪分析,同时分析其中氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的含量.另外,在受精卵培养液中添加GSH的同位素标记物(GSX),利用LC/MS检测受精卵及其培养液中GSX含量.结果表明:1)外源GSH可显著或极显著降低受精后18、24、32 h胚胎内ROS的含量(P＜0.05,P＜0.01).2)处理组胚胎的桑椹胚率(58.67％vs.48.46％)、囊胚率(50.83％vs.34.88％)和囊胚总细胞数(102.26 vs.76.27)显著高于对照组(P＜0.05).3)各发育阶段(受精后18、24、32 h)的处理组受精卵中,GSH的含量均显著高于对照组(P＜0.05),且随发育进程而逐渐下降.4)外源GSX也显著提高了处理组受精卵(受精后18、24、32 h)中GSH含量(P＜0.05),培养液中GSX的浓度则随培养时间的延长而持续下降.综上表明,外源GSH可清除胚胎内ROS,提高胚胎发育率和囊胚质量;LC/MS是定量分析胚胎内GSH及其同位素标记物的可靠方法,可用于外源GSH促进胚胎体外发育的机制研究.

关键词：牛、胚胎发育、谷胱甘肽、氧自由基、液质联用

所属期刊栏目：49

分类号：S823.2(家畜)

资助基金：中国农业科学院家畜胚胎工程与繁殖创新团队ASTIP-IAS06-2018

在线出版日期：2019-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：2622-2631