小鼠miR-487b-3p对C2C12增殖和分化调控作用的研究

摘要：

旨在研究miR-487b-3p对小鼠C2C12细胞增殖与分化的具体调控机制.本研究以小鼠成肌细胞系(C2C12)为研究对象,利用qRT-PCR检测miR-487h-3p在小鼠各组织和C2C12细胞增殖与分化过程中的表达情况;通过转染miR-487b-3p mimics和miR-487b-3p inhibitor后,利用qRT-PCR检测转染效率,并采用qRT-PCR和Western blotting检测增殖标记基因PCNA和分化标记基因MYOD、MYOG和MYHC的表达差异;利用生物信息学软件对miR-487b-3p靶基因进行预测,利用qRT-PCR检测小鼠C2C12细胞增殖与分化过程中PITX2的表达情况,并检测过表达(抑制)miR-487b-3p后PITX2的表达差异,通过双荧光素酶报告系统验证miR-487b-3p和PITX2的靶标关系.结果表明,miR-487b-3p在小鼠骨骼肌中相对表达最高,在C2C12细胞增殖与分化的过程中miR-487b-3p的表达量整体上呈现上升趋势,推测miR-487b-3p参与调控骨骼肌发育.过表达miR-487b-3p后,极显著上调miR-487b-3p的表达(P＜0.01),在转录和蛋白水平均极显著上调PCNA的表达(P＜0.01),显著下调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达(P＜0.05),同时显著下调MYHC(P＜0.05)、MYOD(P＜0.01)和MYOG蛋白(P＜0.05)的表达;而抑制miR-487b-3p后,极显著下调miR-487b-3p的表达(P＜0.01),显著下调PCNA基因的表达(P＜0.05),极显著下调PCNA蛋白的表达(P＜0.01),显著上调MYHC、MYOD和MYOG蛋白的表达(P＜0.05),上调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达,但未达显著水平(P＞0.05).在C2C12细胞增殖和分化过程中,PITX2与miR-487b-3p表达趋势相反;过表达miR-487b-3p能极显著下调PITX2 mRNA的表达(P＜0.01),相反,抑制miR-487b-3p的表达则极显著上调PITX2 mRNA的表达(P＜0.01);双荧光素酶报告系统验证PITX2是miR-487b-3p的直接靶基因.综上表明,miR-487b-3p通过靶向PITX2促进C2C12细胞增殖而抑制其分化.

关键词：小鼠、miR-487b-3p、增殖、分化、PITX2

所属期刊栏目：49

分类号：S811.2(普通畜牧学)

资助基金：现代肉牛牦牛产业技术体系CARS-37;中国农业科学院创新工程项目CAAS-ASTIP-2014-LIHPS-01

在线出版日期：2018-12-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：2371-2383