猪StAR基因启动子区克隆及其转录活性研究

摘要：

旨在通过分析猪StAR基因启动子活性区域,探究猪StAR基因的转录调控机制,从育种学角度为提高猪繁殖力提供新思路.本研究根据Ensembl数据库已公布的猪StAR基因的5’侧翼区序列,利用在线预测软件对该基因启动子区序列信息进行分析,以大白猪基因组DNA为模板,利用特异性引物,进行PCR扩增、测序,进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-StAR双荧光素酶表达载体,转染293T细胞并进行活性检测.结果显示,StAR基因5’侧翼区不含有典型的TATA-box和CpG岛;成功克隆了10个含有不同长度的启动子片段,并构建了各片段与表达载体的重组质粒;转染293T细胞后经双荧光素酶活性检测发现,大白猪StAR基因5’侧翼区存在着核心启动子,其中-196～+127 bp这一区域活性值最高,且显著高于其他缺失片段(P＜0.01),表明在+127～-196 bp的区域内存在重要的正调控因素,外显子1对启动子活性起重要的调控作用.-41～-196 bp为核心启动子区域,该区域存在着关键的正调控元件,包含GATA2、GATA4、SP1、ZNF263、Hoxa9、KLF16和ZNF740转录因子结合位点.本试验通过对StAR基因进行生物信息学分析,并结合不同长度启动子片段双报告基因活性检测,证实了StAR基因的5’侧翼区序列具有启动子转录活性.初步确定了该基因的启动子区域,找到了启动子的核心区域和主要调控区域,为进一步研究StAR基因转录调控机制提供理论依据.

关键词：StAR基因、启动子、荧光素酶活性、报告基因

所属期刊栏目：49

分类号：S828.2;Q785(家畜)

资助基金：河北省现代农业产业技术体系专项HBCT2013070202

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1524-1532