利用酵母随机展示技术对猪肺炎支原体P97上B细胞表位的筛选和鉴定

摘要：

构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库,并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位.设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因,通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG,用DNase I将p97突变基因随机消化成长度100～250 bp的片段,回收产物经3’端加A处理后与用Xcm I酶切的酵母表达载体pCT-Xcm I连接,将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库.利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆,并进一步鉴定其最小抗原表位.结果:1)克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×10 6克隆,所有插入的片段随机分布,覆盖了全长的p97突变基因,文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆;2)随后对文库进行流式细胞分选,经鉴定选出184号一个抗原多肽.从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D(DEKTSSQKDPSTLRA)多肽为一个B细胞表位,该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应.P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定,184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位,本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义.

关键词：猪肺炎支原体、P97黏附蛋白、酵母展示文库、B细胞表位

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分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项1610302016005,1610302017014

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1492-1499