表达禽网状内皮组织增生病病毒env基因的重组马立克病毒的生物学特性

摘要：

旨在构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV) env基因的重组马立克病毒(Marek's disease virus,MDV),并对其生物学特性进行初步研究.以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因,克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+);以其为模板,PCR扩增整个REV env基因真核表达盒并与卡那霉素抗性基因分别克隆进pUC18载体;以其为模板,利用含有MDV SC9-1株meq基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REV env真核表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用Red E/T同源重组技术插入SC9-1的meq位点,最终利用阿拉伯糖诱导表达flp重组酶,敲除卡那霉素抗性基因,阳性重组质粒命名为SC9-env BAC.提取SC9-envBAC质粒转染CEF细胞,拯救重组MDV,利用MDV单抗H19以及REV单抗11B118经间接免疫荧光试验鉴定阳性病毒,命名为SC9-env.分析比较SC9-env在CEF细胞上的复制水平,利用动物试验初步评价SC9-env对SPF鸡的致病性以及SC9-env对SPF鸡感染MDV、REV的免疫保护效果.结果表明,利用同源重组技术构建的重组MDV SC9-env能够稳定表达REV env蛋白,且复制水平与亲本病毒SC9-1相似;该重组毒接种SPF鸡没有明显的致病性,且对rMd5的强毒攻击提供92％的免疫保护,与SC9-1差异不显著;SC9-env显著降低REV感染SPF鸡所引起的体重减轻以及灭活苗抗体下降.构建的表达REV env的重组MDV对感染MDV、REV的SPF鸡具有良好的免疫保护效果.

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒、env基因、同源重组、马立克病毒、生物学特性

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分类号：S858.315.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省科技发展计划项目2014GNC110006;国家自然科学基金青年基金项目31402235;山东省“双一流”奖补资金

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1482-1491