猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用

摘要：

为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3 ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法.结果显示,SYBR染料法和 TaqMan探针法均能有效地扩增 PCV3标准质粒以及其他阳性样品,并且对1.29×102～1.29×109拷贝·μL －1的PCV3标准质粒(Pmd18-t-Cap)呈现良好的线性关系,该方法的检测灵敏度为1.29×102拷贝·μL －1,比常规PCR的灵敏度高100倍,该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应,具有良好的特异性;批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数(CV)均小于1.5％,呈良好的可重复性.用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测,结果显示本地区PCV3阳性率为8.06％(10/124),PCV2和PCV3共感染率为8.06％(10/124).上述结果表明,本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型,为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段.

关键词：圆环病毒3型、SYBR荧光定量PCR、TaqMan荧光定量PCR、检测

所属期刊栏目：49

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家生猪产业技术体系资助项目CARS-35

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1320-1326