猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

摘要：

本研究旨在克隆猪丁型冠状病毒(PDCoV)S1基因(1—1 566 bp),体外表达 S1基因抗原表位预测区Sa(106—1 290 bp)蛋白并制备抗该蛋白质的多克隆抗体.运用生物信息学软件分析 S1核苷酸和编码氨基酸序列特征,将 S1基因抗原表位预测区Sa克隆至原核表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b-Sa,转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达、超滤柱浓缩纯化重组蛋白、Ni柱亲和层析,Western blot检测Sa蛋白的活性,将Sa蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结果表明,CHN-2015毒株 S1基因开放型阅读框大小为1 566 bp(GenBank No.KY398009),编码522个氨基酸,是具有亲水性的非跨膜蛋白,存在15个潜在的B细胞抗原表位;原核表达Sa重组蛋白,该蛋白质在37 ℃下用终浓度为0.8 mmol·L －1IPTG诱导5 h后,蛋白质主要以可溶性形式存在,免疫印迹显示表达的Sa蛋白在上清与包涵体中都有良好的反应性;用纯化的Sa蛋白四次免疫家兔,获得的兔抗Sa蛋白抗体效价可达1:10 240.本研究克隆了 S1基因,原核表达了Sa蛋白和制备了高效价的兔抗Sa蛋白抗体,具有良好的免疫原性,为后续深入开展S蛋白的功能研究奠定了基础.

关键词：猪丁型冠状病毒、S1基因、克隆、原核表达、抗原性、多克隆抗体

所属期刊栏目：49

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500700

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1256-1264