变异猪流行性腹泻病毒M和N融合双基因的原核表达及表达产物免疫原性分析

摘要：

旨在构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的 M和N双基因融合质粒,并分析表达蛋白免疫原性.通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株(GenBank登陆号KJ646580)的 M基因和 N 基因,将 M基因克隆至 pEASY-Blunt E2(pE2)表达载体,构建出pE2-M质粒.利用同源重组原理,采用无缝拼接试剂盒将 N基因克隆至E2-M片段,转化到Trans 1-T1感受态细胞中,构建出pE2-M-N融合双基因质粒并转化 Transetta(DE3),表达出相应的融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达情况.将纯化的M-N融合蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA方法检测融合蛋白的免疫原性.结果表明:扩增出 M和 N基因,成功构建了pE2-M 质粒,并将 E2-M基因与N基因进行有效连接,构建出pE2-M-N融合双基因质粒,表达出了具有免疫原性的M-N融合蛋白,该蛋白能够诱导小鼠产生相应的特异性抗体.变异PEDV的pE2-M-N双基因融合质粒的构建,为进一步开展变异PEDV 的诊断技术和免疫学等研究,奠定良好基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒、PEDV、M基因、N基因、双基因表达

所属期刊栏目：49

分类号：S852.4;S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益类科研院所专项2018R1023-4;福建省自然科学基金项目2015J01112;公益类科研院所专项2017R1023-8

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1249-1255