猪丁型冠状病毒与猪流行性腹泻病毒双重实时荧光定量RT-PCR方法的建立和初步应用

摘要：

猪丁型冠状病毒(PDCoV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV)均为致病性冠状病毒,可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡.为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT PCR方法,根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列,设计了两对特异性引物,分别扩增其N、M基因保守区,并将其克隆至pMD19-T载体;将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板,建立了一种检测PDCoV和PEDV的双重的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,并对其反应的敏感度、特异性和重复性进行了检测.结果表明,本试验所建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法对PDCoV和PEDV的最低检测量分别为51和32拷贝·μL-1,且与PBoV、TGEV、PRV、PCV2无交叉反应,特异性较好;对2016年至2017年在河北省收集的130份仔猪腹泻样本检测,结果显示,PDCoV的检出率为16.9％,PEDV的检出率为66.2％,二者同时感染的检出率为2.3％,与普通RT-PCR检测方法相比,敏感性更高.本研究为PDCoV和PEDV的诊断及分子流行病学调查提供了一种快速、定量检测方法.

关键词：猪丁型冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、实时定量PCR、临床检测

所属期刊栏目：49

分类号：S852.659.6;S854.43(动物医学（兽医学）)

资助基金：河北农业大学百名青年学术带头人培养计划0318011;河北省研究生创新能力培养资助项目CXZZSS2017068;河北省自然科学基金课题C2015204121

在线出版日期：2018-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：852-858