Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究

摘要：

旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响.本试验以6～8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响.结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P＜0.01)和8.6的转膜电压及功率(P＜0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20％ Methanol-1 ％Triton-1％ SDS-RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P＜0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P＜0.01).综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性.上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性.

关键词：蛋白印迹、背肩胛骨棕色脂肪组织、转膜液、黑皮质素-4型受体

所属期刊栏目：49

分类号：Q503(一般性问题)

资助基金：国家自然科学基金31660701,31360283

在线出版日期：2018-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：841-846