山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株CbpA肝素结合结构域鉴定

摘要：

本研究旨在对山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株的胶原结合蛋白(collagen-binding protein,Cbp)CbpA(CbpA-CQ)进行序列分析,鉴定其中2个潜在的肝素结合结构域NRB和B1.运用生物信息学软件分析CbpA-CQ基因及其编码产物.采用PCR扩增NRB和B1基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1.融合蛋白GST-NRB和GST-B1在大肠杆菌DE3菌株中被诱导表达,使用Gluthathione-Sepharose 4B纯化.采用免疫印迹检测融合蛋白GST-NRB、GST B1与HeLa细胞的黏附情况,以及肝素对融合蛋白黏附细胞的抑制情况.结果显示,重庆株CbpA有7个胶原结合蛋白B结构域,约占全长的55％,此结构域与化脓隐秘杆菌、链球菌属等细菌有同源性.重庆株CbpA与化脓隐秘杆菌的CbpA在进化树中聚集成一个进化支.从诱导菌裂解物上清中亲和纯化得到融合蛋白GST-NRB和GST-B1.GST-NRB、GST-B1呈剂量依赖性黏附HeLa细胞,肝素呈剂量依赖性抑制GST-NRB、GST-B1黏附HeLa细胞.结果表明尽管CbpA-CQ有很大变异性,但具有已知化脓隐秘杆菌CbpA的共同序列特征;其NRB和B1区域为肝素结合结构域.

关键词：化脓隐秘杆菌、CbpA、黏附、肝素、肝素结合结构域

所属期刊栏目：49

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：重庆市基础与前沿研究计划项目cstc2015jcyjA80035;国家自然科学基金委员会青年基金项目31402149;重庆市基本科研业务费项目16417

在线出版日期：2018-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：173-180