克隆山羊成纤维细胞IGF2-H19基因座甲基化分析

摘要：

旨在研究山羊体细胞核移植对克隆后代成纤维细胞IGF2-H 19基因座甲基化的影响.以奶山羊耳成纤维细胞(GFC,对照组)和克隆山羊耳成纤维细胞(CFC,试验组)为试验材料,培养至第5代时,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR分析基因的表达差异,亚硫酸氢盐测序(BSP)分析差异甲基化区域的甲基化水平.结果显示,GFC和CFC组细胞的生长曲线均呈典型“S”型,但CFC组细胞的凋亡率显著高于GFC组(P＜0.01);CFC组细胞中Dnmt1 (P＜0.01)、Dnmt3b(P＜0.01)、Tet1(P＜0.05)、Tet2(P＜0.05)、H19(P＜0.05)和IGF2(P＜0.01)基因表达水平均显著低于GFC组,而Tet3、Dnmt3a和IGF2R在2组间无显著性差异;CFC组细胞中IGF2两个差异甲基化区域(DMR1和DMR2)的甲基化水平均显著低于GFC组(74.1％ vs.57.8％,P＜0.01;76.8％ vs.40.0％,P＜0.01),但IGF2-H19印记基因控制区域甲基化水平显著高于GFC组(68.8％ vs.84.0％,P＜0.01).体细胞核移植通过影响Dnmt和Tet家族基因的表达引起IGF2-H19基因座甲基化的异常,导致基因印记紊乱,进而影响再克隆的效率.

关键词：体细胞核移植、再克隆、IGF2-H19、DNA甲基化、山羊耳成纤维细胞

所属期刊栏目：48

分类号：S827.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31301973

在线出版日期：2018-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2277-2285