猪ADAM10基因编码区及其剪接体克隆、序列分析与组织表达研究

摘要：

旨在克隆猪ADAM10基因及其剪接体的编码区(Coding sequence,CDS),利用生物信息学方法分析其序列结构和生物学功能,并揭示ADAM10基因及其剪接体mRNA在猪组织中的表达特征.根据GenBank中公布的猪ADAM10基因的序列信息,设计特异性引物,运用反转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法结合T/A克隆技术进行ADAM10基因及其剪接体编码区的克隆,利用生物信息学方法分析ADAM10及其剪接体蛋白的结构,同时用半定量PCR(Semi-quantitative PCR)分析猪ADAM10基因完整型及其剪接体mRNA在猪不同组织中的表达谱.结果显示,克隆和测序获得两种ADAM10 CDS序列,其中完整型CDS长2 247 bp,编码748个氨基酸;剪接型CDS缺失外显子2～7和部分外显子8,其长度为1 344 bp,编码447个氨基酸.和完整型蛋白相比,猪ADAM10剪接体编码的蛋白不存在前引导序列,但存在完整的信号肽序列和跨膜结构域,并含有金属蛋白酶域和解聚素结构域,其三级结构也和完整型一致.序列比对和进化树分析表明,猪ADAM10完整型蛋白在物种间具有较高的保守性.半定量PCR分析表明,ADAM10基因完整型mRNA在脾中表达量较高,在肾、乳腺、腿肌、输卵管、卵巢、子宫、小肠等组织中低水平表达;ADAM10基因剪接体mRNA在肺中表达量较高,在脾和胃中也有低水平表达.本研究为进一步探究猪A DAM10基因的结构和生物学功能提供了基础资料.

关键词：猪、ADAM10基因、克隆、剪接体、组织表达

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分类号：S828.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31501921;浙江省自然科学基金LQ15C170001;浙江省农业畜禽新品种选育重大科技专项2016C02054-3

在线出版日期：2017-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1579-1590