猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的MARC-145细胞中外泌体的分离与鉴定

摘要：

旨在寻找有效方法,能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中分离细胞产生的外泌体,并为探索外泌体在PRRSV感染细胞时的作用奠定基础.使用试剂盒提取MARC-145细胞产生的外泌体,利用电镜负染色法和Western blot技术对MARC 145细胞产生的外泌体进行鉴定;采用碘克沙醇速率区带离心分离MARC-145细胞产生的外泌体,并用Western blot技术检测外分泌体的分布区间.用PRRSV感染MARC-145细胞后,使用试剂盒对MARC-145细胞产生的外泌体进行初步分离后,采用免疫磁珠捕获技术进行进一步纯化,并使用Western blot进行验证.Western blot结果显示MARC-145细胞产生的外泌体存在特异性标记蛋白CD63 、Tsg101和Alix,不存在外泌体非标记蛋白EEA1 、GRP94和Cytochrome C;电镜负染色结果显示MARC-145细胞产生的外泌体尺寸大小处于30～100 nm,符合外泌体特征.利用Western blot对碘克沙醇速率区带离心中收集到的样品进行分析,结果显示MARC-145细胞产生的外泌体分布于7.2％～18％碘克沙醇密度区间.Western blot结果显示免疫磁珠捕获法获得的对照组不存在外泌体标记蛋白Tsg-101.以上结果表明MARC-145细胞能够产生外泌体,并且通过免疫磁珠捕获法能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中将其分离.

关键词：MARC-145细胞、外泌体、PRRSV粒子、速率区带离心、免疫磁珠

所属期刊栏目：48

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：山西省科技攻关项目20100312016

在线出版日期：2017-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1300-1305