基于恒温隔绝式荧光PCR技术现场检测牛轮状病毒方法的建立及应用

摘要：

轮状病毒(rotavirus,RV)是犊牛腹泻的重要病因,笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技术现场检测牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法.根据BRV和牦牛RV VP6基因序列,设计合成引物和探针,通过优化反应体系,配合商品化PetNAD核酸萃取试剂盒,建立了检测BRV和牦牛RV的iiPCR方法.结果显示该方法只能检出BRV和牦牛RV,不能检出牛冠状病毒、牛星状病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛艾美尔球虫、牛瑞氏隐孢子虫等无关病原;检测下限为96.6 copies·μL-1,重复性好;对30份牛腹泻样本和30份牦牛腹泻样本的检测结果表明,本方法对BRV的检出率是33.33％,对牦牛RV的检出率为73.33％,与文献报道的检测BRV和牦牛RV的方法的符合率分别为100％;对2016年四川阿坝藏羌自治州14个牧场的88份犊牦牛腹泻样本RV的检测结果显示RV核酸阳性检出率为98.86％.本研究建立的BRViiPCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,既可用于BRV检测,又可用于牦牛RV的检测;从核酸提取到报告检测结果仅需1h,操作方便,可现场使用,为BRV的现场快速诊断提供有力的工具.

关键词：牛、牦牛、轮状病毒、VP6基因、恒温隔绝PCR、现场检测

所属期刊栏目：48

分类号：S852.653;S852.659.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：十三五国家重点研发计划2016YFD0500907;国家民委科研项目14XNZ025

在线出版日期：2017-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1092-1098