猪GM-CSF稳定表达细胞系的建立

摘要：

旨在建立能稳定表达猪GM-CSF的细胞系.本研究利用NCBI已公布猪GM-CSF基因序列设计引物,采用RT-PCR法扩增出猪GM-CSF开放阅读框(ORF).发现其长435 bp,编码144个核苷酸的蛋白.该蛋白分子质量为16.3 ku,等电点为7.15.与绵羊、马、猫、牛、狗和人的同源性分别为77.1％、73.6％、72.2％、71.5％、71.3％和70.8％.通过EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后,将GM-CSF基因插入pIRES2-EGFP载体中,构建出pIRES2-EGFP-pGM-CSF重组质粒.该重组质粒转染猪肠上皮细胞(IPEC-J2)后,G418筛选阳性细胞.在转染后24h,荧光定量PCR可见GM-CSF mRNA表达量较对照组及空载体组细胞显著升高(P＜0.01),荧光显微镜下亦可见大量绿色荧光表达.该细胞系在含有G418的培养液中连续传代30次,仍可见GM-CSF基因和蛋白水平的高表达.本研究成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-pGM-CSF和能稳定表达猪GM-CSF的细胞系.

关键词：猪、GM-CSF、真核表达、稳定细胞系

所属期刊栏目：48

分类号：S826.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31101862,31472243

在线出版日期：2017-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：963-970