腺病毒介导的MAT2B过表达促进猪肌内脂肪细胞分化

摘要：

本研究旨在通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶(MAT2B)对猪肌内脂肪细胞分化的影响.本研究以猪脂肪组织为试验材料,提取总RNA,并反转录得到cDNA,参考GenBank收录的猪MA T2B基因mRNA序列设计引物,PCR扩增并连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,进行测序鉴定.结果表明,构建的穿梭载体与骨架载体pAdEasy-1可以实现同源重组,即腺病毒重组载体pAd-MAT2B构建成功;用Pac Ⅰ限制性内切酶酶切线性化pAd-MAT2B载体并回收质粒大片段转染293A细胞可以实现病毒的成功包装,病毒滴度测定可满足原代细胞侵染需要.转染猪原代肌内脂肪细胞后,MA T2B的mRNA和蛋白水平实现了显著的上调.油红O染色结果表明,过表达MA T2B促进了肌内脂肪细胞脂质积累;实时定量结果证明,MAT2B促进成脂标志基因PPARγ和aP2表达的显著上调.综上所述,腺病毒介导的体外表达载体可以成功的实现MAT2B基因超表达;MAT2B正向调控猪肌内脂肪细胞分化.

关键词：腺苷甲硫氨酸转移酶2B、重组腺病毒、肌内脂肪细胞、猪

所属期刊栏目：48

分类号：S828;S813.1(家畜)

资助基金：信阳农林学院青年基金项目201601005;国家重点基础研究发展计划2012CB124705

在线出版日期：2017-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：802-809