盐霉素对鸡原代心肌细胞的毒性作用及其机制的初步研究

摘要：

初步探讨盐霉素对鸡原代心肌细胞的毒性作用及其毒性机制.采用差速贴壁法结合化学纯化法分离鸡原代心肌细胞,应用免疫荧光法鉴定心肌细胞纯度,给予1、5、10、20、50μg·mL-1盐霉素处理后,观察心肌细胞形态,采用MTT法测定盐霉素对心肌细胞活性的影响;比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放、肌酸激酶(CK)活性;流式细胞术分析盐霉素对心肌细胞凋亡及线粒体膜电位的影响;电子显微镜观察盐霉素对心肌细胞超微结构的影响;荧光显微镜观察盐霉素对心肌细胞氧化应激的影响;比色法测定盐霉素对心肌细胞Caspase-3、Caspase 8和Caspase-9蛋白酶活性的影响;qRT-PCR检测Caspase 3、Caspase 8、Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)、Bax及Bcl2 mRNA的转录水平.结果表明:分离所得鸡原代心肌细胞形态良好,纯度大于90％;盐霉素以显著的浓度-时间依赖性方式抑制心肌细胞生长并诱导细胞死亡;盐霉素导致心肌细胞LDH释放极显著增加(P＜0.01),细胞内CK酶活性增强,呈浓度依赖性(P＜0.01);盐霉素导致心肌细胞凋亡率极显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位(△ψm)明显下降(P＜0.01);电子显微镜观察显示盐霉素导致心肌细胞线粒体严重肿胀、空泡化,嵴溶解甚至消失;盐霉素导致心肌细胞内活性氧(ROS)显著升高;细胞质Caspase-3、Caspase-8和Caspase 9蛋白酶活性均极显著升高(P＜0.01);qRT PCR结果表明凋亡相关基因Cas pase-3、Caspase-8、Caspase 9、Cyt-C及Bax mRNA转录上调,Bcl 2 mRNA转录下调(P＜0.01).盐霉素可以通过细胞凋亡引起鸡心肌细胞死亡,线粒体途径和死亡受体途径可能共同参与了盐霉素诱导的鸡心肌细胞凋亡.

关键词：盐霉素、鸡、原代心肌细胞、细胞毒性、凋亡

所属期刊栏目：48

分类号：S859.796(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31672612;江苏高校优势学科建设工程资助项目

在线出版日期：2017-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：740-751