绵羊NYD-SP27基因在BHK-21细胞中的稳定表达及其特征鉴定

摘要：

旨在构建稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞株,对NYD-SP27基因的表达特征进行分析,为进一步研究NYD-SP27基因功能奠定基础.本研究克隆绵羊NYD-SP27基因,并将其插入到真核表达载体pD-sRedl C1中,利用猪捷申病毒2A肽(P2A)将NYDSP27蛋白和红色荧光蛋白连接以实现共表达,将重组质粒pDsRed-P2 A-Flag-NYDSP转染至BHK-21细胞中,经G418筛选获得稳定转基因细胞株,利用RT-PCR、间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot对NYDSP27基因的表达进行鉴定.结果表明,NYD-SP27基因稳定整合至宿主细胞基因组;NYD-SP27蛋白能够在BHK-21细胞中正常表达,分子大小约为63ku;在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中,P2A成功自我剪切.本研究成功构建了绵羊NYD-SP27基因的真核表达载体,建立了稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞系.

关键词：绵羊NYD-SP27基因、稳定表达、BHK-21细胞、P2A

所属期刊栏目：48

分类号：S826.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金项目31460683

在线出版日期：2017-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：637-644