慢病毒介导siRNA抑制1型鸭肝炎病毒复制

摘要：

为筛选能抑制DHAV-1复制的siRNA,探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防治中的应用,采用PCR法扩增DHAV-1 RdRp基因,并构建pEGFP-RdRp融合表达EGFP-RdRp蛋白;根据RdRp的序列测定结果,设计3条RdRp特异siRNA,并合成相应shRNA分别插入pmiRZip△中构建pRdRp-shRNA;共转染pRdRp-shRNA和pEGFP-RdRp于HEK-293T细胞,通过荧光显微镜法、流式细胞术、相对荧光定量PCR法筛选抑制效率较高的siRNA;将高效siRNA用于病毒载体pmiRZip介导的慢病毒制备;通过计算重组慢病毒转导、DHAV-1感染的鸭胚胎成纤维细胞中病毒TCID50和RdRp基因表达量确定siRNA对病毒及病毒基因的抑制作用.结果显示,3个siRNA均能抑制RdRp基因的表达,包含GDD模体的shRNA2的抑制率最高,对应重组病毒能使DHAV-1的TCID50下降6.2 lg,RdRp基因转录量下降89.6％,抑制时间至少达120 h,为鸭病毒性肝炎临床防治提供了新思路.

关键词：鸭病毒性肝炎、GDD模体、RdRp、RNA干扰、siRNA

所属期刊栏目：48

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：2016年度江苏省高校自然科学研究面上资助项目16KJB230004;江苏省“六大人才高峰”第十二批培养对象资助项目NY-023,10410015002;江苏省大学生创新创业训练计划校企合作基金项目201612806030H

在线出版日期：2017-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：522-529