钒诱导蛋鸡输卵管膨大部上皮细胞氧化应激模型的建立

摘要：

本试验旨在通过蛋鸡输卵管膨大部上皮细胞(OMECs)的原代培养,构建利用偏钒酸铵(V5+)建立氧化应激模型的方法.试验选用开产前2～3周龄健康罗曼蛋鸡,分离、培养及鉴定OMECs.利用单因素设计6个不同水平的钒浓度(0、25、50、100、250、1 000 μmol·L-1)处理12h后,测定细胞活力、细胞凋亡、细胞活性氧(ROS)的生成,细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性,丙二醛(MDA)的含量,细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量.结果表明:1)分离培养的细胞24 h后形成细胞岛,呈“铺路石样”;免疫荧光染色细胞抗细胞角蛋白(CK18)、卵清蛋白(OVA)、雌激素受体1(ESR1)和孕酮受体(PGR)呈阳性,抗波形蛋白呈阴性.2)50和100μmol·L-1的钒处理OMECs 12 h后,细胞活力分别下降到(69.90±2.78)％和(63.60±1.57)％,显著低于25μmol·L-1钒处理组(P＜0.05),但是显著高于250和1 000 μmol·L-1钒处理组(P＜0.05).3)细胞凋亡率随着钒添加量的增多而升高,且各处理组差异显著(P＜0.05);1 000 μmol·L-1的钒细胞凋亡率为最高(P＜0.05).4)ROS的测定结果表明,100和250 μmol·L-1钒处理组的FITC相对平均值显著高于0μmol·L-1钒处理组(P＜0.05),且250 μmol·L-1钒处理组的FITC相对平均值显著高于100 μmol·L-1钒处理组(P＜0.05).5)50μmol·L-1钒处理组SOD活性显著低于0 μmol·L-1钒处理组(P＜0.05),但MDA含量差异不显著.而100μmol·L-1钒处理组的MDA含量显著升高(P＜0.05);50和100 μmol·L-1钒处理组细胞CAT活性显著低于0μmol·L-1钒处理组(P＜0.05);LDH释放量随着钒的添加剂量的增加而升高,1 000 μmol·L-1钒处理组LDH的释放量最高,且100 μmol·L-1钒处理组LDH的释放量显著高于0μmol·L-1钒处理组(P＜0.05),达到141.61±2.81 U·gprot-1.综上表明,OMECs原代细胞培养成功,在OMEC原代细胞里添加100 μmol·L-1的V5+处理12h,可建立OMECs氧化应激模型.

关键词：钒、OMECs、氧化应激、细胞凋亡、ROS

所属期刊栏目：48

分类号：S831;S85(家禽)

资助基金：国家自然科学基金青年项目31402031;四川省教育厅青年基金13ZB0290;科技部科技支撑计划2014BAD13B04;四川省科技厅2014NZ0043,2014NZ0002,2013NZ0054

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：340-350