酵母表达的长角血蜱谷氨酰胺转移酶及其活性分析

摘要：

谷氨酰胺转移酶(TGase)通过催化蛋白质的谷氨酰胺残基与赖氨酸残基之间形成ε-(γ-谷氨酰基)赖氨酸异肽键,或在与肽结合的谷氨酰胺残基处掺入伯胺,促进蛋白质分子内和分子间的交联,形成网状的高分子聚合物,参与多种重要的生物学活动.本研究旨在克隆和表达长角血蜱(Haemaph ysalis longicornis)的谷氨酰胺转移酶基因(HlTGase,GenBank登录号为KX59300),并分析重组蛋白质的活性,评估其可能的应用价值.首先从长角血蜱上海株的成虫提取总RNA,根据表达序列标签的序列信息,设计引物扩增并克隆HlTGase基因,以质粒pPICZC为表达载体,将该基因在毕赤酵母中重组表达,进而对其编码蛋白质的分子特征及可能的应用价值进行评估.结果显示HlTGase基因的开放阅读框为2 262 bp,编码了一条756 aa的多肽链,该多肽链具有四个谷氨酰胺转移酶结构域,理论相对分子质量为84.6 ku;系统发育树显示其与果蝇的谷氨酰转移酶亲缘关系最近;在毕赤酵母中成功表达的重组蛋白质具有谷氨酰胺转移酶的活性,能催化酪蛋白交联成较大的分子.本研究成功地用酵母表达了长角血蜱谷氨酰胺转移酶,重组蛋白质有催化蛋白质交联的活性,具有一定的应用前景.

关键词：分子特征、长角血蜱、谷氨酰胺转移酶、催化活性、毕赤酵母

所属期刊栏目：48

分类号：Q78;S852.746(基因工程（遗传工程）)

资助基金：福建省自然科学基金2014J01120;福建师范大学生命科学学院本科生拔尖人才培养项目

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：331-339