牦牛肠道病毒间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

摘要：

为了建立准确、快速的牦牛肠道病毒(yak enterovirus)检测方法,利用本实验室已获得的一株牦牛肠道病毒SWUN-AB001,免疫健康兔获得抗SWUN-AB001高免血清,建立了一种检测牦牛肠道病毒的间接免疫荧光试验(IFA)方法,并对其工作条件和时间进行筛选,优化出最佳条件.采用该方法对40份临床腹泻样本进行了牦牛肠道病毒的检测,并与RT-PCR的检测结果进行比较.结果表明:获得的高免血清在该IFA方法中的最佳稀释度为1∶100,工作时间为30 min;FITC标记的羊抗兔IgG(二抗)的稀释度为1∶800,工作时间为45 min,牦牛肠道病毒特异性亮绿色荧光颗粒清晰可见;同时与牛病毒性腹泻病毒、轮状病毒、大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌和空肠弯曲杆菌反应均未见明显的荧光颗粒;该方法能够检测SWUN-AB001病毒的最低浓度约为20 TCID50·mL-1;该方法的临床检测结果与RT-PCR的检测结果之间无差异(P=0.329).结果表明该方法特异性强、重复性好、灵敏度高,为该病毒在牦牛养殖地区的流行病学调查、临床诊断和快速诊断试剂的开发奠定了基础.

关键词：牦牛、肠道病毒、间接免疫荧光检测方法

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十三五”国家重点研发计划2016YFD0500907;四川省科技计划项目青年基金2014JQ0044;四川省教育厅创新团队项目13TD00527;四川奶牛传染系流产的病原调查研究SASA2015A12;西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目2016NGJPY10

在线出版日期：2017-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2450-2456