水牛bbu-miR-103-1在泌乳期与非泌乳期表达模式及靶向基因的初步研究

摘要：

旨在探讨bbu-miR-103-1在水牛泌乳期和非泌乳期的差异表达模式,并预测其靶向调控基因及功能.本研究应用qRT-PCR检测bbu-miR-103-1,在水牛泌乳期和非泌乳期的差异表达.构建bbu-miR-103-1前体表达质粒LpEZX-pre-miR-103-1,并在293T细胞中包装高滴度的慢病毒颗粒,用于感染水牛乳腺上皮细胞实现过表达bbu-miR-103-1,同时应用化学合成的bbu-miR-103-1抑制剂转染水牛上皮细胞实现抑制表达bbu-miR-103-1,研究bbu-miR-103-1对PANK3及乳脂代谢相关基因表达的影响.结果表明,水牛泌乳期bbu-miR-103-1的相对表达量为非泌乳期的5.29倍(P＜0.01);成功构建的慢病毒载体LpEZX-pre-miR-103-1包装获得了感染滴度为3.47×106 PFU·mL-1的慢病毒颗粒;过表达和抑制表达bbu-miR-103-1分别极显著下调和上调了水牛乳腺上皮细胞PANK3基因的相对表达量(P＜0.01);过表达bbu-miR-103-1极显著提高了ACACA、GPAM、DGA T1和PDK4基因的表达(P＜0.01),对SREBP1c、ADFP、CD36、ACSS1等基因产生了显著的上调作用(P＜0.05).过表达bbu-miR-103-1通过下调PANK3的表达,反馈提高了SREBP1c的mRNA水平,促进了以ACACA开头的脂肪酸从头合成.表明bbu-miR-103-1对水牛乳脂肪合成有十分重要的促进作用,为揭示水牛高乳脂形成和调控机理提供了分子依据.

关键词：水牛、bbu-miR-103-1、表达模式、PANK3

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分类号：S823.83;S813.3(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31260552;国家高技术研究发展计划863计划2011AA100607;优势生态牧草品种遴选及果草耦合系统碳氮源汇的研究与示范桂科合14125008-2-13;国审牧草新品种紫色象草的繁育与推广桂渔牧科201453057

在线出版日期：2016-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：2191-2201