ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析

摘要：

为研究猪miR-148a(ssc-miR-148a)的转录调控机制,对其启动子进行了克隆及分析.本试验首先设计特异性PCR扩增引物,分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段,并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上.通过生物信息学方法,在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位.将重组报告质粒转染293T细胞,分析启动子活性.采用不同浓度碱性成纤维生长因子(bFGF)处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞,检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的表达,及其对启动子活性的影响.结果显示,克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043 bp片段具有启动子活性,该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点.0、5和10 ng· mL-1浓度bFGF处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后,ssc-miR-148a表达均显著下降(P＜0.05),DNMT1 mRNA显著增加(P＜0.05).启动子活性均显著下降(P＜0.05),5和10 ng· mL-1浓度间无显著差异(P＞0.05).结果表明,ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043 bp片段内,启动子区域有转录因子SP1结合位点,其表达受bFGF的调控.

关键词：ssc-miR-148a、启动子、克隆、bFGF、DNMT1

所属期刊栏目：47

分类号：S828;S813.3(家畜)

资助基金：广西壮族自治区研究生教育创新计划项目YCBZ2014013;国家自然科学基金31560632;广西自然科学基金项目2014GXNSFAA118084;广西水牛遗传繁育重点实验室开放课题项目SNKF-2014-03

在线出版日期：2016-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1969-1976