坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立

摘要：

为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化.将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度为4.16 μg·μL-1.通过方阵试验,确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100 ng·孔-1,检测血清的最佳稀释倍数为40倍.随后对检测条件进行了优化,优化后的结果:抗原的最佳包被条件是4℃作用过夜;酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍,37℃作用1h;阴阳血清的临界值为0.278.一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性.对采集自山东各地的80份血清样品进行检测,其检测结果显示,该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5％以上,且比传统的中和试验更敏感.对TMUV感染鸭群的血清进行检测,描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律,为该病的防治提供重要的理论依据.以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法,尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景.

关键词：鸭坦布苏病毒、NS1蛋白、间接ELISA、检测方法

所属期刊栏目：47

分类号：S858.325.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金31272583,31472199;国家水禽产业技术体系项目CARS-43-10;山东省科技发展计划项目2014GNC111023

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：970-977