单增李斯特菌膜裂解相关基因缺失突变株的构建及生物学特性鉴定

摘要：

拟探明单核细胞增多性李斯特菌(单增李斯特菌)分离株M7可能的低致病力机制.利用SOE-PCR及同源重组法构建M7膜裂解相关基因hly及plcB单缺失(M7-△hly和M7-△plcB)及双缺失突变株(M7-△hly/plcB),比较它们与亲本株的生物学特性差异.结果如下:PCR及反转录PCR表明突变株构建成功.突变株M7-△hly和M7-△hly/plcB因hly缺失致其溶血活性丧失.plcB缺失突变株M7-△plcB和M7-△hly/plcB无可见溶脂活性.单缺失突变株M7-△plcB、M7-△hly与M7具有相似的细胞黏附及增殖能力(P＞0.05).MOI为1 000时,双缺失突变株M7-△hly/plcB对Caco-2细胞毒性最低(11.10％),M7-△hly次之(23.53％)(P＜0.05).空斑试验表明菌株M7和M7-△plcB仅能在无庆大霉素培养基中形成空斑.hly及plcB缺失致单增李斯特菌对免疫抑制小鼠毒力降低.单增李斯特菌M7低致病力可能与hly及plcB的高水平表达有关,致细菌对宿主细胞毒性增强而从细胞内逸出,使其不能躲避宿主免疫系统而被清除.

关键词：单增李斯特菌、膜裂解相关基因、细胞毒性、生物学特性

所属期刊栏目：47

分类号：R378.99.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：浙江省科技厅公益技术研究农业项目2014C32047;2015年度留学人员科技活动项目择优资助经费项目;浙江万里学院省重中之重学科开放基金KF2014007;宁波市自然科学基金2015A610189;浙江检验检疫局重点科研项目2014-ZKZ-017

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：779-788