利用CRISPR/Cas9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用

摘要：

旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异.首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5a和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序.CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46％～58％;测序结果进一步证实目的基因敲除成功.本试验成功构建大肠杆菌a roA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具.

关键词：CRISPR/Cas 9系统、大肠杆菌、aroA基因、敲除、同源修复

所属期刊栏目：47

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：福建省畜禽新发疫病诊断和防治技术研究ky0040052

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：762-770