10.11843/j.issn.0366-6964.2016.03.004
巴马小型猪OCA2基因序列、组织表达分析及载体构建研究
旨在为猪的毛色调控机制和模拟与OCA2基因相关的人类疾病模型的研究建立基础.本研究将GenBank公布的猪OCA2基因序列(NC_010457.4)所缺失的5个外显子(20~24号外显子)进行了克隆和划分,在基因组水平和eDNA水平上采用PCR扩增和Sanger测序方法对划分结果进行了验证;并对OCA2基因进行生物信息学分析,同时在广西巴马小型猪中对OCA2基因外显子的多态位点进行了筛选.采用实时荧光定量PCR技术(Q-PCR)分析了OCA2基因在各组织中的表达规律,并以皮肤全长cDNA为模板构建重组表达质粒,并利用Xho Ⅰ和SacⅡ限制性内切酶进行双酶切验证.在已公布的猪OCA2基因中成功划分和克隆了所缺失的外显子,并在OCA2基因所有外显子中共发现了10个SNPs位点,其中7个为同义突变,3个为错义突变(R124H、G509D、R573H);猪OCA2基因在多种组织中广泛表达,其中,肺、大脑、小脑相对高表达,脾、胃、盲肠和皮肤中度表达,而在心和肝中表达量较低;OCA2基因重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建成功.本研究初步探讨了猪OCA2基因的序列信息及组织表达规律,并构建了OCA2基因重组表达质粒,为该基因下一步的功能学研究及疾病模型的研究奠定了基础.
猪、OCA2基因、荧光定量PCR、重组表达质粒、单核苷酸多态性
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S828;S813.3(家畜)
973国家科技重大专项2011CBA01005;国家高技术研究发展计划2012AA020602
2016-09-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共10页
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