利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究

摘要：

为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育,本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果.结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38％,其中32个为插入突变,6个为缺失突变.插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4％.本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38％,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性.

关键词：CRISPR-Cas9系统、基因组编辑、突变率

所属期刊栏目：47

分类号：S828;S813.3(家畜)

资助基金：哈尔滨市科技局项目2013RFQYJ037

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：207-212